水中大腸菌群的檢測是人類生活飲用水安全的保障，能有效預(yù)防人體被大腸菌群感染。我國早前檢測水質(zhì)大腸菌群采用的方法是平皿計數(shù)法，此方法操作較為復(fù)雜，實驗人員也需要有較高的技術(shù)素養(yǎng)，普及實施較難。

　　酶底物法(Defined Substrate Technology,DST)是目前全球都在廣泛使用的大腸菌群檢測方法，近些年來我國也開始嘗試引進使用，并于2018年將此方法納入國標(biāo)，該方法操作簡便快捷，時間周期短，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，不需要有嚴(yán)格的實驗條件即可進行，對操作人員要求也不高，下面優(yōu)爾普就來介紹一下酶底物法檢測大腸菌群的具體步驟。

酶底物法檢測大腸菌群儀器

酶底物法檢測大腸菌群操作方法

1、工作原理

　　酶底物法是在選擇性培養(yǎng)基上產(chǎn)生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)的細(xì)菌群組，其能分解色原底物釋放出色原體，使培養(yǎng)基呈顏色變化，以此來檢測水中的大腸菌群。

2、立科酶底物法簡介

　　立科酶底物法使用Colitech試劑進行檢測，這種試劑符合《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測方法》，其采用GB/T5750.12-2006中固定底物技術(shù)的MMO-MUG培養(yǎng)基，當(dāng)試劑加入含有總大腸菌群細(xì)菌組的水樣，目標(biāo)細(xì)菌在含有固定底物ONPG-MUG的培養(yǎng)基中繁殖，大腸菌群細(xì)菌組產(chǎn)生的特異性生物酶β-半乳糖苷酶能分解MMO-MUG培養(yǎng)基中的固定色原底物ONPG，產(chǎn)生特征性黃色熒光，同時水樣中大腸埃希氏菌產(chǎn)生特異性B-葡萄糖苷酸酶能分解MMO-MUG培養(yǎng)基中的固定熒光底物MUG，產(chǎn)生特征性藍(lán)色熒光，以此定性檢測水中大腸菌群和大腸埃希氏菌。

　　當(dāng)水樣中少數(shù)非目標(biāo)細(xì)菌的生物酶試圖和ONPG、MUG反應(yīng)并干擾檢測結(jié)果時，Colitech培養(yǎng)基中特殊配方的基質(zhì)會抑制其反應(yīng)過程，控制假陽性的產(chǎn)生。同時，這些特殊培養(yǎng)基質(zhì)可以有效促使目標(biāo)細(xì)菌的生物酶和固定底物反應(yīng)，所以假陰性發(fā)生率比傳統(tǒng)方法更低。

3、儀器與試劑

儀器：培養(yǎng)箱(36±1℃)、高壓蒸汽滅菌器、定量盤(51孔和97孔)、立科程控定量封口機、試管、稀釋瓶、移液管、量筒.

酶底物法檢測儀器及其配置

試劑：立科Colitech酶底物法檢測試劑，滅菌稀釋水.

4、酶底物法檢測操作步驟

1)水樣稀釋

　　檢測實驗所需水樣為100ml，若水樣污染嚴(yán)重可進行稀釋(取10ml水樣加入到90ml的滅菌稀釋水中，必要時可加大稀釋度)。本實驗取20個水樣分別進行總大腸菌群(1-10號)和糞大腸菌群(11-20號)的檢測。

大腸菌群水樣取樣瓶

2)定性試驗

　　用100ml的無菌稀釋瓶量取100ml水樣，加入專用培養(yǎng)基，搖晃至溶解，以36±1℃的溫度在培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。

3)定量試驗

　　用100ml的無菌稀釋瓶量取100ml水樣，加入專用培養(yǎng)基，搖晃至溶解，將該溶液導(dǎo)入51孔(總大腸菌群)和97孔(糞大腸菌群)的定量盤內(nèi)，然后將定量盤放入立科程控定量封口機封口，以36±1℃的溫度在培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。

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5、結(jié)果判定

酶底物法檢測大腸菌群對比

1)定性反應(yīng)

　　對水樣培養(yǎng)24小時后進行結(jié)果判定，如顏色變成黃色，則判定為陽性，表示水中含有大腸菌群，若水樣未發(fā)生顏色變化，則判定為陰性，表示水樣中不含大腸菌群。定性結(jié)果以大腸菌群檢出或未檢出作報告。

2)定量反應(yīng)

　　對培養(yǎng)24小時后定量盤內(nèi)的水樣進行結(jié)果判定，若孔穴內(nèi)的水樣有黃色反應(yīng)則表示該孔穴中含有大腸菌群，總大腸菌群對照51孔定量盤MPN表，糞大腸菌群對照97孔定量盤MPN表，結(jié)果以MPN/L報告。若所有孔穴均未產(chǎn)生黃色反應(yīng)，以未檢出作報告。

　　有關(guān)實驗室使用酶底物法檢測水中大腸菌群的方法步驟就和大家分享到這里了，酶底物法操作簡便，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，二次污染小，無需再無菌室內(nèi)操作，滿足GB5749-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)和GB8978-1996污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)，適用于源水、瓶裝水、飲用水、畜牧用水、廢水、再生水、食品水、醫(yī)療用水等各類水樣，目前已在國內(nèi)廣泛應(yīng)用。